検量線サンプルを使用してリアルタイムPCRを行う(プライマーの確認)
反応液の準備
凍結保存していたスタンダードサンプルを融解し、分光光度計で濃度を測定する
コピー数を計算する
10倍段階希釈列(10^0~10^5程度)を作成する
リアルタイムPCR試薬を準備する(計算したコピー数は1μlにおける濃度である)
機械に反応条件を入力する(試薬添付文章に従う)
一般的には 95℃5~10分(ホットスタートは非特異が出にくい)
95℃0~5分
60℃前後20~30秒
72℃10~30秒
融解曲線プログラム
4℃ ...