資料紹介

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目的

課題4ではPCRの原理を学ぶため、口中の粘膜細胞からDNAを抽出しPCRより第16染色体上にあるPV92遺伝子座の一部を増幅する。その後その増幅産物をアガロース電気泳動で解析、PV92遺伝子座に挿入されているAlu配列を検出することにより個人のDNAの違いを検出する。

課題5ではEcoRI処理前、後の増幅DNAを電気泳動で解析することにより、前実験で増幅したDNAがPV92配座のDNAであることを確認する。
原理

-Polymerase Chain Reaction-

この反応はDNAの変性(denature)、アニーリング(annealing)、伸長(extension)の3つの過程から成る。変性では、PCR溶液を94 ℃に加熱することで二本鎖DNAを一本鎖に出来る。次のアニーリングでは、反応溶液の温度を55～68 ℃に下げることで変性した一本鎖DNAは元の二本鎖に戻ろうとするが反応溶液中には鋳型DNAよりも過剰量のプライマーが存在しているのでプライマーと相補的塩基対を形成する。伸長過程では、一本鎖には結合しないTaqポリメラーゼがプライマーが結合して二本鎖になっている...

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